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復(fù)蘇冷凍細(xì)胞注意事項

點(diǎn)擊次數(shù):1660 更新時間:2017-04-26

1、冷凍越慢越好,復(fù)蘇越快越好

細(xì)胞冷凍越慢越好,細(xì)胞冷凍前,要有充足的時間;復(fù)蘇是相反的,速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,迅速放在37℃水浴中,然后使勁搖,讓它盡快融化。

2、細(xì)胞凍存和復(fù)蘇注意事項

和液氮接觸時,要戴保護(hù)眼鏡和手套。因為復(fù)蘇過程中搖晃,小瓶有可能會爆炸;還有,凍存液中的DMSO是有毒致癌的。所以接觸的時候一定要帶好手套。

3、凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠

無論再怎么小心,細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的。所以,一開始凍存細(xì)胞的數(shù)量要足夠。

4、做好標(biāo)記

把培養(yǎng)瓶放入提手,末端應(yīng)該扎有小牌,注明主人的名字,細(xì)胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細(xì)胞名稱,代數(shù)和凍存日期。實(shí)驗室的液氮罐都是公用的。每個人應(yīng)該有屬于自己的提手,會為找自己液氮罐省去好多時間。

5、細(xì)心照料

復(fù)蘇的細(xì)胞非常脆弱,需要我們的細(xì)心呵護(hù)。一切和細(xì)胞接觸的動作都要輕柔。

6、DMSO的問題

前面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么,解凍之后,應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢?

是不需要去除的。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細(xì)胞外,99%的細(xì)胞都不需要去除DMSO。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。

7、解凍前后細(xì)胞所用物質(zhì)要相同

因為每一種細(xì)胞都有自己特定的,并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,會造成細(xì)胞生長不良,甚至死亡。

細(xì)胞培養(yǎng)是個費(fèi)力的事情,要經(jīng)常關(guān)注。要時刻注意培養(yǎng)箱里面的細(xì)胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù),就可以解決這個問題。

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